荧光蛋白作为遗传编码工具被生命科学家广泛应用。几乎所有研究的内源性蛋白都可以与荧光蛋白融合。荧光蛋白的主要应用包括,启动子活性的测定、细胞器标记、蛋白质互作、药物筛选、传感器等等。
义翘神州大量提供即用型表达克隆。这些克隆在基因的C端或N端带有GFPSpark®/OFPSpark® 标签,可瞬时转染哺乳动物细胞,生成带有荧光的蛋白。无需任何操作,直接用荧光显微镜观察细胞器或者亚细胞结构的形态。

义翘神州推荐的细胞器标记的表达克隆:

1) 绿色荧光蛋白GFPSpark®/橙色荧光蛋白OFPSpark® 可供选择
2) 直接标记细胞器
3) 研究定位和蛋白转移的完美选择
4) 操作简单,无需其他的抗体或者化学处理

荧光蛋白

绿色荧光蛋白(GFP)最早是在维多利亚水母中发现,并于1992年首次克隆出基因。1994年首次做为体内荧光标签使用,此后掀起了对绿色荧光类蛋白(GFP)的一系列研究热潮,包括结构学,生物化学,生物物理学等方面。发表了很多荧光蛋白在分子生物学和细胞生物学中应用的科学论文。同时各种颜色的荧光蛋白被开发出,目前已有上百种的荧光蛋白。义翘神州的绿色荧光蛋白GFPSpark® 和红(橙)色荧光蛋白 OFPSpark®是自主研发的产品,相比较市面上的荧光蛋白信号更强更稳定。

 

GFPSpark® 是绿色荧光蛋白GFP的突变体,其激发波长和最大发射波长分别是487nm 和508nm。GFPSpark® 最大的优点是成熟时间短,能更快的发出荧光。同时具有更强的绿色荧光信号,比其他绿色荧光更易观察。
OFPSpark®是红(橙)色荧光蛋白DsRed的一种衍生物,其红(橙)色荧光激发波长和最大发射波长分别是549nm 和 566nm 。具有很高的光稳定性和pH值稳定性。OFPSpark® 快速成熟使得在转染哺乳动物细胞8h后就能清楚的检测到红色荧光信号。

- 更强的荧光
- 高pH稳定性
- 快速成熟
- 推荐用于基因表达分析、细胞器标记和亚细胞结构标记。

绿色荧光蛋白GFPSpark® 橙/红荧光蛋白OFPSpark®

GFPSpark® / OFPSpark® 标签的 ORF 表达克隆

  • • 更高的蛋白表达水平:增强型 CMV 启动子
    • 多个标签可供选择: C-,N-GFPSpark® /OFPSpark®
    • 每条基因都经过全长测序验证
  • • 适用于哺乳动物细胞表达,可以瞬转和稳转
    • 每条基因都可做表达验证
以下是ORF 表达克隆的质粒图谱:  

GFPSpark® /OFPSpark® 标签的 ORF 克隆的表达验证

GFPSpark®与EGFP对比:荧光更强,更稳定

GFPSpark®与 商业化橙色荧光蛋白Red对比: 荧光更强,更稳定

A) pCMV3-GFPSpark® 与 pCMV3-EGFP 重组质粒在293H细胞中瞬时表达。在455~495nm激发光下用荧光显微镜可以在细胞质中检测到绿色荧光。GFPSpark® 在转染24h后可以检测到很亮的绿色荧光。
B) TUBB基因C端分别标记GFPSpark®和EGFP,构建到pCMV3表达载体上。
C) TOMM20基因C端分别标记GFPSpark®和EGFP标记,构建到pCMV3表达载体上。
这些不同的表达质粒瞬时转染HeLa细胞,48h后,用激光扫描共聚焦显微镜(尼康)检测绿色荧光信号。GFPSpark®的荧光亮度强于EGFP。
OFPSpark® 和商业化橙红色荧光蛋白Red分别构建到pCMV3载体上。瞬时转染293H细胞,48h后,在532.5-587.5nm的激发光下,检测红色和橙色荧光信号,OFPSpark® 产生更亮的荧光信号。

GFPSpark®/OFPSpark®标签的 ORF表达克隆—细胞器标记质粒

不同的亚细胞定位基因与荧光蛋白融合构建到pCMV3载体上。这些不同的细胞器标记质粒瞬转HeLa细胞。48h后,用激光扫描共聚焦显微镜(尼康)检测荧光信号.(GFPSpark®激发/发射最大值= 487 / 508nm,OFPSpark®激发/发射最大值= 549 / 566nm)。

HG11111-ANG HG11215-ACG HG12063-ACG HG11277-ACG
HG12282-ACR HG14013-ANG HG11626-ACR HG11263-ACR

点击查看更多细胞器标记质粒的表达图片

GFPSpark® / OFPSpark® 标签 的ORF表达克隆列表

细胞器 分子 货号 产品名称 荧光 货期
Autophagosome ATG12/apg12 HG11111-ACG GFPSpark fusion with ATG12 C terminal Green In Stock
ATG12/apg12 HG11111-ACR OFPSpark fusion with ATG12 C terminal Orange/Red In Stock
LC3A/MAP1LC3A HG14322-ACG GFPSpark fusion with MAP1LC3A C terminal Green In Stock
LC3A/MAP1LC3A HG14322-ACR OFPSpark fusion with MAP1LC3A C terminal Orange/Red In Stock
LC3B/MAP1LC3B HG14555-ACG GFPSpark fusion with MAP1LC3B C terminal Green In Stock
LC3B/MAP1LC3B HG14555-ACR OFPSpark fusion with MAP1LC3B C terminal Orange/Red In Stock
ARHI/DIRAS3 HG14239-ACG GFPSpark fusion with DIRAS3 C terminal Green In Stock
ARHI/DIRAS3 HG14239-ACR OFPSpark fusion with DIRAS3 C terminal Orange/Red In Stock

Full list of GFPSpark® & OFPSpark® tag cDNA ORF of Organelle Marker

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